分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器。
而分光光度法則是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性和定量分析。 常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū),(2)400~760nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進行校正檢定。 單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時,被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關(guān)系如下式:
A=-log(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸收度;
為入射的單色光強度;
為透射的單色光強度;
T 為物質(zhì)的透射比;
k 為吸收系數(shù);
L 為被分析物質(zhì)的光程
c 為物質(zhì)的濃度
分光光度計的簡單原理
分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。